细胞培养(换液传代储存复苏）所需试剂细胞完全培养基

细胞培养(换液/传代/冻存/复苏所需试剂细胞完全培养基：★推荐使用海星生物细胞配套专用培养基1.细胞处理后的第二天，在显微镜下观察细胞状态，如死细胞较多且细胞密度较低，需要进行换液操作。vsv病毒接种细胞多长时间换液mtt铺板加药换液吸取旧培养基对细胞有没有影响⒈选择适当的细胞接种浓度。

1、细胞比较满还需要培养24小时再给药吗

我也是做过Lipo2000转染293a细胞，同样要求24小时。由于转染后的细胞一般都会贴壁性减弱，即使很小心的换液也可能使细胞脱落，提前24小时铺板的目的就在于给细胞充分的时间牢固贴壁，所以从这方面来看48小时有利无害。但是另外一方面来说，细胞生长旺盛有利于转入，所以应该尽量在细胞生长速度比较快时做转染。如果48小时细胞都快长老了就不好了。

2、动物细胞传代顺序

传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释，分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。本实验以传代大鼠骨髓充间质干细胞为例进行细胞传代的步骤做一介绍。

3、细胞培养(换液/传代/冻存/复苏

所需试剂细胞完全培养基：★推荐使用海星生物细胞配套专用培养基1.细胞处理后的第二天，在显微镜下观察细胞状态，如死细胞较多且细胞密度较低，需要进行换液操作。（1）悬浮细胞请在高倍镜下观察，一般而言，活细胞轮廓圆润、界限清晰、透明度大、折光性强。如细胞活率较高，则继续正常培养。（2）贴壁细胞如观察到较多细胞漂浮，请在高倍镜下观察，判断漂浮着的细胞是死细胞还是暂未贴壁的活细胞。

（3）半贴壁细胞正常培养会有部分细胞漂浮，属正常现象。请在高倍镜下观察，判断漂浮着的细胞是否是死细胞。如细胞活率较高，则继续正常培养。2.如需换液，参考以下步骤：（1）悬浮细胞：收集培养容器中的所有细胞悬液。250g离心4min后弃去上清。使用预热的完全培养基重悬，将细胞悬液接种到合适的培养容器中。（2）贴壁细胞：直接弃去培养容器中的上清，添加预热的完全培养基至原培养容器中。

4、培养液颜色什么时候换半液

培养液颜色变化不仅与培养基种类有关，还与培养菌的种类、生长时期、气氛条件等相关因素有关。一般而言，培养液颜色变化的主要原因是对碳源（如糖类）的利用，如果一个完好的培养基经常被高密度的细菌种群释放的代谢产物污染，则容易到发生颜色变化，但是并不表示这个培养基就不能继续使用。通常情况下，如果培养液颜色变为较深的棕色或橙色，可换半液或全部更换，以免对菌落德形态、生理特性、抗生素敏感性等产生影响。

5、测ldh释放,长时间需要进行细胞换液吗

测ldh释放，长时间需要进行细胞换液国外检测体外细胞毒性比较常用的方法有MTT比色法，XTT比色法，利用线粒体内部酶的活性，将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测LDH法，通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性其他还有细胞增殖度法，检测碱性磷酸酶活性等。细胞换液：随着细胞培养时间的的延长，培养基中的营养物被消耗，细胞的代谢产物愈来愈多，尤其是细胞呼吸反应释放出的CO2及其它酸性代谢产物的增加，培养液的pH值越来越低，培养液的颜色越来越黄。

6、细胞给药72h,中间需要换液吗

不是同一种操作。细胞换液：随着细胞培养时间的的延长，培养基中的营养物被消耗，细胞的代谢产物愈来愈多，尤其是细胞呼吸反应释放出的CO2及其它酸性代谢产物的增加，培养液的pH值越来越低，培养液的颜色越来越黄。此时就需要对细胞进行换液。换液时吸掉旧培养液，用PBS洗涤细胞一至二次，加入适量的新鲜培养基即可。细胞传代：随着培养时间的延长和细胞不断分裂，细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止。

传代步骤：1、吸掉旧培养液，用PBS洗涤细胞一至二次。2、加入trypsinEDTA溶液，37度作用数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量含血清的新鲜培养基终止trypsin作用，离心后再吸掉上清液。3、加入适量的新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

7、心肌细胞的细胞培养

鼠心肌细胞的培养和分离目的建立心肌细胞培养模型，用于心肌细胞体外实验。方法采用胰酶消化及新生大鼠心肌细胞与非心肌细胞如成纤维细胞、血细胞等的差时贴壁法分离提纯心肌细胞，建立心肌培养模型。结果心肌细胞培养最长成活时间达3天，心肌细胞受消化时间的影响有不同的形态表现。结论可以利用差时贴壁法分离新生鼠心肌细胞并在体外进行培养，胰酶消化以低浓度短时间为佳。

Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌，洗净残血，剪成约1mm³大小的组织块，弃去DHanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml，于37°C静置5min，吸出上层悬液，并加入等量的含血清培养基。经终止消化后离心(1800r/min)弃上清液，加入含血清的培养液。

8、vsv病毒接种细胞多长时间换液

mtt铺板加药换液吸取旧培养基对细胞有没有影响⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。

否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。⒉药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。⒊时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。